Tải bản đầy đủ - 0 (trang)
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Tải bản đầy đủ - 0trang

20

Dao phẫu thuật, chỉ lin

Thủy tinh thể nhân tạo nghiên cứu và thủy tinh thể nhân tạo chứng

Dung dịch cố định, cồn, toluen, thuốc nhuộm Hematoxylin Eosin – HE,

thuốc nhuộm 3 màu của Masson để làm tiêu bản.

2.5.2. Các bước tiến hành

2.5.2.1. Đánh giá tính phù hợp mơ

Bước 1: Phẫu thuật cấy ghép vật liệu vào mô dưới da vùng mông thỏ.

- Thỏ đã được làm sạch lông bộc lộ vùng mông

- Gây tê tại chỗ vùng mông của thỏ bằng lidocain 2%.

- Làm sạch, sát trùng vùng mông thỏ.

- Rạch da, bóc tách mơ liên kết, đưa mảnh vật liệu thủy tinh thể nhân tạo

vào lớp mô liên kết dưới da thỏ. Sau đó khâu kín vết mổ bằng chỉ lin. Mỗi thỏ

sẽ được ghép 1 mẫu thủy tinh thể nhân tạo.

- Đánh dấu vùng phẫu thuật.

Bước 2: Theo dõi tình trạng tồn thân và tại vị trí cấy ghép vật liệu của

thỏ sau phẫu thuật trong thời gian nghiên cứu

Bước 3: Đánh giá sau ghép 4 tuần và 8 tuần

- Phẫu thuật bộc lộ vùng mô dưới da thỏ có ghép thủy tinh thể nhân tạo

- Đánh giá tình trạng đại thể và vi thể vùng mơ cấy ghép vật liệu sau 4

tuần và 8 tuần theo các chỉ tiêu nghiên cứu.

Bước 4: So sánh các chỉ số đánh giá giữa lô nghiên cứu và lô chứng.

2.5.2.2. Kĩ thuật làm tiêu bản mô học sử dụng trong nghiên cứu.

a. Kỹ thuật làm tiêu bản nhuộm Hematoxylin-Eosin (H.E)

- Mục đích: quan sát cấu trúc hình thái ở mức vi thể mơ sau ghép thủy

tinh thể nhân tạo

- Quy trình:

 Lấy bệnh phẩm: lấy vùng mô dưới da xung quanh vị trí ghép vật liệu

với bán kính 1 – 1,5 cm. Pha mẫu bệnh phẩm với kích thước 1,0 x 0,5 x 0,3 cm

 Mẫu mô được cố định bằng dung dịch Formalin 10%



21

 Khử nước bằng cồn có nồng độ tăng dần

 Làm trong miếng mô bằng Toluen

 Đúc đứng miếng mô trong khuôn nến riêng và đánh số thứ tự

 Cắt mẫu thành các những lát mỏng 4 µm

 Nhuộm màu lát cắt bằng Hematoxin-Eosin, dán lamelle

 Tiêu bản được quan sát trên kính hiển vi quang học và chụp ảnh ở độ

phóng đại 250x, 500x và 100x

 Soi tiêu bản dưới kính hiển vi quang học để đánh giá hình ảnh vi thể

của mơ.

b. Kỹ thuật làm tiêu bản nhuộm 3 màu theo Masson

- Mục đích: quan sát rõ thành phần mô liên kết, cụ thể là sợi collagen ở

vùng mơ dưới da xung quanh vị trí ghép thủy tinh thể nhân tạo

- Quy trình:

 Mẩu mơ được cố định bằng dung dịch Formalin 10%.

 Khử nước bằng cồn có nồng độ tăng dần.

 Làm trong miếng mô bằng Toluen.

 Đúc đứng miếng mô trong khuôn nến riêng và đánh số thứ tự.

 Cắt mẫu thành các những lát mỏng 4 µm.

 Nhuộm màu lát cắt bằng dung dịch nhuộm theo phương pháp 3 màu

của Masson , dán lamelle.

 Tiêu bản được quan sát trên kính hiển vi quang học và chụp ảnh ở độ

phóng đại 100x, 250x và 1000x.

 Lên kính.

- Nhận xét thành phần mơ liên kết, cụ thể là sợi collagen ở vùng mô dưới

da xung quanh vị trí ghép thủy tinh thể nhân tạo

2.5.2.3. Phần mềm định lượng KS400



22

Phần mềm định lượng KS400 của hãng Carl Zeiss hoạt động theo

nguyên lý ứng dụng phép đo cường độ màu trên các ảnh màu kỹ thuật số

được ghi lại qua kính hiển vi từ các tiêu bản vi thể, dựa trên cơ sở chế độ màu

RGB ( đỏ, xanh lá cây, xanh dương)

Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng phẩn mềm KS400 để đếm tất

cả tế bào viêm có trong các tiêu bản của mỗi mẫu bệnh phẩm, đo độ dày màng

xơ bao quanh vật liệu nghiên cứu.

2.6. Chỉ tiêu đánh giá.

Các chỉ tiêu đánh giá tính phù hợp mơ (Theo tiêu chuẩn ISO 10993 – 6)

Tình trạng tồn thân, tại chỗ của con vật:

- Tình trạng tồn thân: tình trạng ăn uống, hoạt động, chất tiết của thỏ

- Tình trạng tại chỗ: sự liền vết mổ, tình trạng nhiễm trùng, rò rỉ dịch,

đùn đẩy vật liệu ra ngồi.

Tình trạng đại thể vùng cấy ghép vật liệu sau 4 tuần và 8 tuần:

- Màu sắc, cấu trúc mô.

- Hiện tượng viêm, hoại tử.

- Sự phát triển tổ chức xơ.

- Hiện tượng ngấm màu vật liệu ra mơ xung quanh.

Tình trạng vi thể vùng cấy ghép vật liệu sau 4 tuần và 8 tuần:

- Cấu trúc mô, tế bào

- Tế bào viêm: Bạch cầu đa nhân trung tính, Đại thực bào, Tương bào,

Lympho bào…

- Tình trạng phát triển của mô xơ. Đo độ dày lớp mô liên kết xơ bao

quanh vật liệu bằng phần mềm KS 400 liên kết với kính hiển vi định lượng

Axioplan 2.

Tình trạng thủy tinh thể nhân tạo sau cấy ghép:

- Màu sắc, hình dạng thủy tinh thể nhân tạo sau ghép

- Bề mặt.



23

- Tình trạng ăn mòn.



Tài liệu bạn tìm kiếm đã sẵn sàng tải về

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Tải bản đầy đủ ngay(0 tr)

×