Tải bản đầy đủ - 0 (trang)
Nguyên lý của kĩ thuật tách chiết DNA

Nguyên lý của kĩ thuật tách chiết DNA

Tải bản đầy đủ - 0trang

Hiện nay trên thị

trường có sẵn rất nhiều

bộ kít tách chiết DNA

khá tiện dụng:



- Việc nắm rõ nguyên lí tách chiết DNA là khá qua trọng để

giúp chúng ta hiểu rõ hơn về cách thưc hoạt động của bộ kit,

giải quyết vấn đề khi có việc xảy ra.

- Cho đến nay đã có rất nhiều quy trình tách chiết DNA được

đưa ra và báo cáo thành công bởi các nhà nghiên cứu. Đới với

mỗi loại mơ, tế bào quy trình tách chiết sẽ có thể khác nhau.



Ngun lí tách chiết DNA từ tế bào vẫn gồm các bước cơ bản sau:

• Bước 1: phá vỡ nguyên liệu ban đầu( tề bào, mơ) để mở tế bào và giải phóng acid

nucleic ( DNA và RNA ) ( nghiền trong nito lỏng và hòa trong đêm chiết)

• Bước 2: bổ sung các chất chống các chất hoạt hóa enzyme ADNase và làm biến tính

các phân tử protein, dịch hữu cơ,...

• Bước 3: tách DNA khỏi các tạp chất khác bằng máy ly tâm.

• Bước 4: kết tủa, rửa và hòa tan DNA (rửa bằng dung dịch cồn, hòa tan trong TE hoặc

nước cất).



Nguyên liệu tách chiết DNA:

những tế bào có nhân ( tế bào ở

dạng tươi sống hoặc đã chết...)

 Phá vỡ màng tế bào bằng biện

pháp cơ học hoặc hóa học.

 DNA tách ra thường bị gãy có

chiều dài khoảng 20Kb đến

200Kb.

 Do DNA gãy nhiều chỗ nên vẫn

còn đại diện đầy đủ gen của bộ

gen. Tuy thế nếu DNA bị gãy

nhiều quá, quá ngắn có thể, hạn



Phần 2: Các bước tiến hành

1. Dụng cụ và hóa chất



EPPENDORF



MICROPIPET



Máy ủ nhiệt



Tủ hút khí độc



Tủ cấy vơ

trùng



Nồi hấp tiệt

trùng



Tủ lạnh gồm: tủ

mát và tủ âm

sâu (-20℃ và

-70℃)



Máy đo

pH



Máy Vortex

Máy li tâm



Nguyên tắc:

- Các phân tử khác nhau sẽ lắng với vận tốc

khác nhau khi chịu lực tác động của lực ly

tâm.

- Tùy thuộc vào khối lượng và tỉ trọng của

các phân tử vật chất mà người ta chia hai

loại li tâm:

 Ly tâm phân đoạn: dùng phân tách các

phần tử vật chất khác nhau dựa vào khối

lượng của chúng.



Các hóa chất thường

dùng:

1.EDTA:



khi màng

bị phá vỡ, một loạt các

chất được giải phóng

ra dung dịch, trong số

chúng có các loại

enzym thủy phân acid

nucleic thành những

mảnh vụn, bởi vậy

dùng EDTA để ức chế

hoạt động đó.



2.TRIS: để điều

chỉnh độ pH



3. CTAB: là hóa chất



dùng trong chiết suất

acid nucleic có hiệu

quả cao và được sử

dụng phổ biến.



Tài liệu bạn tìm kiếm đã sẵn sàng tải về

Nguyên lý của kĩ thuật tách chiết DNA

Tải bản đầy đủ ngay(0 tr)

×